[CALI: chromophore-assisted laser inactivation]
[FALI: fluorophore-assisted laser(light) inactivation]

レーザー分子不活性化法。
RNAiより高い時空間分解能を持つタンパク質阻害法（Jay,1988）。
レーザー光で励起した蛍光色素の発色団から生じた活性酸素種（フリーラジカル）が目的タンパク質の構造変化を誘起して阻害する（Horstkotte,Henning,2005; Surrey,Leibler,1998）。

【分類】

　・MP-CALI（multiphoton excitation-evoked CALI）
　　　（Tanabe,Takamatsu,2005）
　　　　GFPはフリーラジカル放出効率が200〜1000倍も低いが
　　　　EGFPを用い多光子励起を応用して局所的に特定タンパク質のみを破壊
　・SELT-FALI法
　　　　白熱電灯や手元照明装置を用いる簡便な分子ターゲティング法

【方法】

　◆蛍光色素
　　　・malachite green
　　　　　　疎水性で凝集しやすい（Jay,1988）
　　　　　　パルスレーザー必要（Jay,1988）
　　　　　　　　argon-pumped laser定常光(7.2mW/cm2)でも可能
　　　　　　　　（Surrey,Leibler,1998）
　　　・fluorescein
　　　　　　malachite greenの50倍の効率（Surrey,Leibler,1998）
　　　　　　励起光blueなので細胞内色素に吸収される可能性
　　　・FITC
　　　・EGFP（enhanced GFP）MP-CALIで使用
　　　　　　GFPはmalachite green同様高エネルギー必要
　　　　　　　（Surrey,Leibler,1998）
　　　　　　　　比較的nonphototoxicなのと一致
　◆化学標識した抗体やリガンド
　　　・目的タンパク質と特異的に結合

【特徴】

　◆局所破壊（Hoffman-Kim,Jay,2007）
　　　蛍光分子活性化で生じたsinglet oxygen
　　　30nm以内（fluorescein: Surrey,Leibler,1998）
　　　　　他分子に色素付けFALIしたときに失活したタンパクとの平均距離
　　　　　radicalのlifetimeが局所性を決定
　　　half-maximal damageはfluorophoreから4nm以内
　　　6nm（malachite green: Linden,Jay,1992）
　　　free radicals（Liao,Jay,1994）
　◆色素の付加
　　　・抗体
　　　・タグ（HAkinesin）

【応用】

　　・Regulation of Nerve Growth Mediated by Inositol 1,4,5-Trisphosphate Receptors in Growth Cones
　　・Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy
　　・Multi-photon excitation microscopy in intact animals
　　・Chang,Jay,1995
　　・Wang,Jay,1996
　　・Sydor,Jay,1996
　　・Muller,Bonhoeffer,1996
　　・Schmucker,Jay,1994