[PCR: polymerase chain reaction]
DNAポリメラーゼ連鎖反応(Mullis,1993)。
【特徴】
◆熱安定性の高いDNA polymerase
・TaqDNA polymerase
好熱性細菌 Thermus aquaticus由来
◆プライマー primer
◆thermal cycler(恒温装置)
◆増幅可能塩基対は数十から数千bp
【手続き】
◆熱変性 denature(95°C前後)
〇反応溶液
・鋳型DNA
・primer
・dNTP
・DNA polymerase
〇温度の設定
・DNA長さ
・酵素の種類
・増幅DNA断片の長さ
◆アニーリング annealing
2種類のプライマーが結合
◆DNA伸長反応(extension)
DNAポリメレースの最適温度まで上げる
【応用】
◆RAPD (random amplified polymorphic DNA)
ランダムなオリゴヌクレオチド(10-20nucleotides)をプライマーに
パターンの違いから生物種の違いを判断
2018/10/03 masashi tanaka