[biocytin]

バイオサイチン。ビオシチン。C16H28N4O4S（372.48）。

　　

高感度の順行性トレーサー(Izzo, 1991: Terashima, 1995)でavidinと強く結合。
ビオチン化したリジン。

【特徴】

　◆白色固体で室温で安定
　◆水/DMSOに易溶
　◆avidinとの高い結合能（解離定数 10-15 M）
　　○アビジン・ビオチン・ペルオキシダーゼ複合体（ABC complex）
　　　　ペルオキシダーゼラベルしたアビジン
　　　　　　・DAB染色（diaminobenzidine tetrahydrochloride）
　　　　　　　　明視野で観察可能
　　　　　　　　特定の組織処理で電子顕微鏡で観察可能
　　　　　　　　・avidin-HRP
　　　　　　　　・Streptavidin-HRP
　　　　　　　　・Avidin-Biotin-HRP
　　　　　　・DAB増感法（ニッケル・コバルトを利用）
　　○Avidin-FITC
　　　　蛍光色素とavidin結合
　◆長所
　　　・注入は圧注入で良い (PHA-Lは電気泳動的）
　　　・低分子量372.5なので拡散しやすい
　　　　　大脳皮質の細胞では数〜数十分で軸索末端まで染色可
　　　・単一レベルの軸索・終末が標識できる
　　　　　　（この点ではPHA-Lの方が断然優れている）
　　　・注入後生存期間（通常12ー48時間）が短くて良い
　　　　　　急性実験や軸索の成長の研究ができる
　　　・電顕観察が容易
　◆欠点
　　　・生体内で迅速に代謝される
　　　　　　長い生存期間が必要な実験はできない
　　　・グルタールアルデヒド固定が必須
　　　　　　輸送されたBiocytin を組織に保持するため
　　　　　　免疫組織化学・蛍光トレーサーとの多重標識が制限される
　◆The amino acid residue
　　　ビオチンがanamide linkageでcovalentlyにLys residueに結合
　　　Biotinはcarboxyl基でε-amino group of a lysyl residueと密集
　　　　　in the apoenzymes to which biotin is the coenzyme
　　　　　the predominant linkage in which biotin is found

【プロトコル】

　　・記録
　　　　陽圧は控える（記録終了後10-20min灌流放置して固定してもよい）
　　　　抜くときは垂直・水平に交互にゆっくり動かす
　　・固定
　　　　・4%パラフォルムアルデヒド・0.2%ピクリン酸
　　　　　　光学顕微鏡用・免疫組織化学を組み合わせる場合
　　　　・0.05-1%グルタルアルデヒド・4%パラフォルムアルデヒド・0.2%ピクリン酸
　　　　　　光学顕微鏡用
　　　　・1.25%グルタルアルデヒド・2.5%パラフォルムアルデヒド・0.2%ピクリン酸
　　　　　　電子顕微鏡用