ナイスタチン。ニスタチン。

穿孔パッチ法に利用されるポリエン系抗生物質。
amphotericin Bに類似。

【特徴】

　◆作用機序
　　　細胞膜のエルゴステロールと結合して膜に小孔を作る
　　　　・単一分子(monomeric form)でcation選択的チャネル
　　　　・tail-to-tail dimerでanion選択的チャネル
　　　　　　(Kleinberg&Finkelstein,1984)
　　　孔直径8Å（MW 300以上の分子は非透過）
　　　　　Na+,K+,Li+,Cs+,Cl-などを通す
　　　　　　　陽イオンの方が透過性高い（PNa/PCl = 10）
　　　　　　　数分で電極内濃度と細胞内濃度均衡
　　　　　　　Cs+はK+チャネルつぶしてくれる
　　　　　　　多価イオン（Ca2+,Mg2+など）はほとんど通さない
　　　　　ナイスタチン自体は細胞内に入らない
　　　チャネル透過性は電位依存性ない
　◆穿孔パッチ法（Horn&Marty,1988; Korn,1991）
　　　・ストック
　　　　　DMSOでの高濃度保存（50mg/ml）で-20℃でも数日しかもたない
　　　　　　　高濃度DMSOが膜にダメージを与える可能性
　　　　　50-100ug/mlではsonicationでも難溶でaggregateしがち
　　　　　　　stockにもpipette(100ug/ml)にもsonication必要
　　　　　一連のdouble bonds（光感受性・熱感受性高い）
　　　　　　　光から保護する必要（顕微鏡照明も不要ならきること）
　　　　　　　　（おそらくdilute溶液では内部filter効果がないため）
　　　　　　　暗室冷蔵(<0度)で溶液効果1週間以上保持
　　　　　　　（100-250mg/ml in DMSO to 250ug/ml: Zhou&Neher,1993）
　　　　　　　　　backfillのような短時間でも暗くすべき
　　　　　　　　　溶液を超音波でよく混ぜると効果増大・穿孔時間減少
　　　　　　　　　　　そのためsonicatorの水レベルboilになるよう調節
　　　　　　　　　　　その後細胞内液に溶かしてsonication 2-4min
　　　　　　　　　　　　（この間も光・熱から保護すること）
　　　　　　　　　電極3-5MOでdip5-15sでbackfill後2-5minでseal
　　　　　　　　　　　sealから1-5minでRs=30-70MO
　　　　　水溶液に溶かすと1-2時間で使えなくなる
　　　　　・nystatin:fluorescein-Na=1:10のメタノール溶液
　　　　　　　遮光していれば長時間保存可能
　　　　　　　使用直前に窒素ガスでメタノールを除去
　　　　　　　　　fluorescein-Naの両親媒性のおかげでnystatinの溶解度上昇
　　　・シール困難
　　　　　・対策
　　　　　　　・giga seal後に電極内灌流（Horn&Marty,1988）
　　　　　　　・電極先端(<0.5mm)に無nystantin液(dip<2sec)
　　　　　　　　　　nystatinはback-fill
　　　　　　　　　　泡tapして除去しても無nystatin領域は保持されるようだ
　　　　　　　・強い陽圧かけず短時間でアクセスした方がよい
　　　　　　　・常時bath灌流してnystatin除去
　　　・ポア形成
　　　　　・シール成立から2-10min
　　　　　・直列抵抗= Rs+Rp（Rp:ポアの抵抗）
　◆抗真菌
　　　膜に小孔作成して殺菌
　　　カンジダ症の治療
　　　　　腎毒性が強いため局所的投与

【方法】

　GΩシールの形成をしやすくするため
　　・N-F法（ナイスタチン-フルオレシン法）（Yawo.H&Chuhma.N.,1993）
　　・N-N法（N-F法のナイスタチンが光で急速に不活性化する点を改善）