Bassoon-deficient miceの内有毛細胞ではシナプス・リボンが膜から離れることを再確認し、Icaが減少に加え、Ica減少のみでは説明できないdCm減少、postのラセン神経節細胞のAPの閾値上昇と潜時の増大が生じることを示した一方で、一部の早い放出は残る上、持続性放出は影響を受けないことも示し、ribbonの機能は同期した早い小胞の放出であるとした。

【結果】

◆cochlear IHC
　　長時間高い時間正確性を保つ（Fuchs,Moser,2003）
　　matureだと普通1つのribbonある（Smith&Sjostrand,1961）
◆spiral ganglion neuron(SGN)
　　1個のIHCから入力（Liberman,1982）

・RIBEYE（Schmitz,Sudhof,2000）
・PICCOLO（Dick,2001）
・bassoon & RIBEYE（tom Dieck,2005）
・bassoon KO mice（tom Dieck,1998）
　　photoreceptorでribbonがなくなる
　　視覚阻害（Dick,2003）

　◆
　　　8-week-old mice
　　　　　3-week-old（聴覚獲得直後）ではWTでもmutantでも膜上ribbon多い
　　　　　　3 week oldではEPSCも大きい
　　　　　　発達とともにリボン減る（Shnerson,Pujol,1981）
　　　organs of Cortiの免疫組織化学
　　　○ribbon
　　　　　・CtBP-2(RIBEYE B-domainと20a.a.しか変わらない)
　　　　　　　A-domainの抗体と共局在するので確かにribbonだろう
　　　　　　　　　細胞核も染めるので細胞数把握可能　
　　　　　　　　　BassoonやPiccoloと共局在
　　　　　　　　　　　リボン部位以外のsignalは遠心性終末だろう
　　　○GluR
　　　　　・mutantでも数変わらない
　◆Bassoon KO mutants
　　　○リボンが細胞膜から離れる
　　　　　電顕でリボンない
　　　　　active zoneにtubularやcisternal membrane profiles（cisterns）
　　　　　　　脱分極後にリボンに見える大きいendosomal膜成分に類似
　　　　　　　（Paillart,Sterling,2003; Lenzi,Roberts,2002）
　　　　　　　（Holt,Lagnado,2003）
　　　　　　　　特にリボンから離れた場所で顕著
　　　　　　　　　浮いたリボン近傍では小胞に類似な構造
　　　　　　　　WTでは2/7でわずかにのみ存在
　　　○リボンの大きさ
　　　　　高解像度のmultifocal 4 Pi-microscopy
　　　　　　（Hell&Stelzer,1992; Egner,Hell,2002）
　　　　　　　deconvolved 3D-reconstructions
　　　　　　　　WTでは密接して並ぶRIBEYEとGluRがmutantでは離れている
　　　　　　　　WTではum以下のRIBEYE spot多いがmutantでは大きい塊が散在
　　　　　　　　　(65% spots compared with 16% in wild type)
　　　○auditory brainstem responses
　　　　　mutantではclicksやshort tone burstsに対する応答閾値上昇
　　　　　　first peak (I)が減少し閾値上刺激に対しても遅延
　　　　　　outer hair cell amplification阻害によるものではない
　　　　　　　　otoacoustic emissions（Kemp,1978）は正常
　　　　　　　　electrocochleographyも正常
　　　　　　こうした症状はヒトでも見られる（Starr,Berlin,1996）
　　　　　　　　IHCやSGNの障害か？
　　　○電気生理
　　　　　・Ica減少（W3でもW8でも）
　　　　　　　insufficient recruitment and/or stabilization of CaV1.3
　　　　　　　カルシウム・チャネルの電位依存性は類似
　　　　　・Fast exocytosisが大きく減少
　　　　　　　10ms脱分極に対するdCm減少
　　　　　　　SGNのcompound AP amplitude減少
　　　　　　　Icaよりはribbon数が重要
　　　　　　　　　WTのIca減少させてもmutantにまで減少しない
　　　　　　　　　　　[Ca]o 10mMを2mMに
　　　　　　　　　W3,W8ではIca変わらないがdCm W3の方が大きい
　　　　　　　fast releaseに関してはIcaと放出の関係も阻害
　　　　　　　　　dCm/Ica
　　　　　　　sustained放出は変わらず
　　　　　　　　　dCm/Icaも変化なし
　　　　　　　エンドサイトーシスも変わらず
　　　○放出の解釈
　　　　　・the fastest discernible component (τ < 9ms)
　　　　　　　　RRP（Neher,1998）は18fF(640小胞)
　　　　　　　　　　mutant放出を引いてribbon-dependent RRP計算
　　　　　　　　　　　　15fF(530小胞)
　　　　　　　　　　リボン10個なら53–64小胞/ribbon
　　　　　・mutantの放出は単一指数でよくfit
　　　　　　　　fastはわずかに残る5fF(210小胞: τ<10ms)
　　　　　　　　　　IHCにつき11個ribbon離れて1ribbonついているのに対応
　　　　　　　　　　mutantでも14小胞/ribbonが早く放出される
　　　　　　　　　　　　でもSGNに同期出力できないのはなぜか
　　　○post記録（immature IHC afferent synapses）
　　　　　brief acoustic stimulus in vivo
　　　　　小胞1個でもSGN脱分極して閾値に到達
　　　　　　　同期した複数の小胞入力がしばしば生じる
　　　　　　　　（Glowatzki, E. & Fuchs,2002）
　　　　　　　　　APのjitterを減少させる機能があるのでは
　　　　　　　　　　　submillisecond ITD（Trussell,1999）
　　　○hairの早い放出はdocked以外も含まれる可能性
　　　　　（Edmonds,Schweizer,2004; Spassova,2004）
　　　○W8 WTでは42 ribbon-containing synapses
　　　　　電顕で小胞数数える
　　　　　　最大125-203個の小胞がribbonについていて16-30小胞がdocked
　　　　　　　　したがってdockedよりもRRP(53-64小胞)の方が多い