カルシウム・イメージング（furaptra）を行いつつ、膜容量測定とFM1-43を用い、シナプス小胞の放出と取り込みを同時に検出できる状態で、異なる長さの0mVの脱分極を用い、エクソサイトーシスには3成分、エンドサイトーシスには2成分が存在することを示し、また[Ca]iが速い取り込みを抑制し、持続的放出を促進することが分かった。

【方法】

　◆細胞外液
　　　120 NaCl, 2·5 CaCl2, 2·5 KCl, 1 MgCl2, 10 glucose
　　　10 Hepes (pH 7.3)
　◆細胞内液（電極2-4MO; Rs 20-30MO(<5min)）
　　　4 MgCl2, 3 Na2ATP, 1 Na2GTP, 0·4 BAPTA
　　　20 Hepes (pH 7·2)
　　　250 ug/ml nystatin or amphotericin B (260 mosmol/l)
　◆膜容量測定
　　　piecewise linear technique(50mV, 2kHz)
　　　　　時定数3ms・4-pole Besselでフィルター
　　　　　capacitance calibration by dithering the capacitance by 100 fF
　　　　　容量記録はSD 10msのガウス関数との畳み込みでフィルター
　　　　　f = 1/2π 1/RsCm (Gillis, 1995)
　　　　　　典型的intact Mb(Cm=12pF; Rs=25MO)ではf=530Hz

【結果】

　◆単離Mb細胞
　　　・holding -70mVでRinput 1-10GO (液間電位補正してなさげ)
　　　・-40mV以上の脱分極で膜容量ジャンプ
　　　　　　ICa活性化の電位と同じ（Electrical resonance and Ca2+ influx in the synaptic terminal of depolarizing bipolar cells from the goldfish retina）
　◆三相性の放出
　　　・first component（10ms以内）
　　　　　1200-1800小胞（シナプス終末の1.6%の膜容量）
　　　・second component（1s）
　　　　　4400小胞
　　　・third component
　　　　　1000小胞 /secで持続的放出
　　　　　[Ca]i依存性
　◆二相性エンドサイトーシス
　　　・fast endocytosis（0.8/s）
　　　　　100msまでの短い脱分極では全てこちらの取り込み
　　　　　脱分極時間を延ばすと抑制？
　　　・slow endocytosis（0.1/s）
　　　　　脱分極時間を延ばすと増大（5secで50%）
　◆膜容量変化
　　　・放出はカルシウム・チャネル閉口で急速に止まる（膜容量0.8/sec）
　　　・数秒の持続的刺激の後、膜容量は定常時の5%も増大
　　　　　持続的放出によって0·9%/secで膜容量増大
　　　　　これでバランスしていると考えると0·2 /sec
　◆刺激
　　　・200ms
　　　　　膜容量測定でもFM蛍光でも放出量は変わらず
　　　・長時間刺激（>500ms）
　　　　　カルシウム・チャネルが閉じた数秒後も[Ca]i・膜容量・FM1-43増大

【文献】

　・Mb細胞の放出は一過性
　　　(膜容量測定のみ: Dynamics of synaptic vesicle fusion and membrane retrieval in synaptic terminals; Calcium dependence of the rate of exocytosis in a synaptic terminal)
　・Mb細胞の持続的放出を証明(膜容量・FM1-43測定: Continuous vesicle cycling in the synaptic terminal of retinal bipolar cells)