キンギョMb細胞単離標本で、Ca電流を記録しながら、長い脱分極パルスを与えたところ、膜容量変化やリポーター細胞のNMDA受容体に、少量の速い成分と大量の遅い成分、2種類の応答が見られ、2つの放出プールが存在することが分かった。

【方法】

　◆刺激
　　　・刺激間隔30s以上
　◆標本
　　　・網膜水平細胞（catfishからの単離）
　　　　　低Ca溶液（0.1mg/ml hyaluronidase; 30-50mg/ml cysteine-activated papain）
　　　　　　　110 NaCl, 2.6 KCl, 1 NaHCO3, 0.5 NaH2PO4
　　　　　　　1 NaPyruvate, 4 HEPES, 16 glucose（pH7.2, 260mOsm）
　　　　　コントロール溶液でリンス
　　　　　　　125 NaCl, 2.6 KCl, 2.5 CaCl2, 1 MgCl2, 10 glucose
　　　　　　　10 HEPES, 0.1mg/ml BSA（pH7.4, 270mOsm）
　　　　　低Cl溶液（Ca感受性Cl電流を阻害）
　　　　　　　Clの70%をmethanesulfonateで置換
　　　　　Co溶液（リーク電流の計測）
　　　　　　　Ca, MgをCoに置換
　　　　　ガラスピペットでtrituate
　　　　　15度で1-10日間培養
　　　・Mb細胞（goldfishからの単離）
　　　　　large bulbous synaptic terminal（Saito&Kujiraoka,1982）
　　　　　単離後1-3時間後に使用
　◆bioassay technique（Release of endogenous excitatory amino acids from ON-type bipolar cells isolated from the goldfish retina）
　　　dishをinverted顕微鏡上で観察
　　　・BC（Cs電極液）
　　　　　　　85-100 Cs-glutamate, 30 CsCl, 2 MgCl2, 5 Na2-ATP
　　　　　　　10-30 HEPES, 0.1(博論0.2) BAPTA（pH7.2, 270mOsm）
　　　　　　　　　直列抵抗 20-45MO, 補正30-50%
　　　・HC（Cs電極液）
　　　　　　　125 CsCl, 0.5 CaCl2, 2 MgCl2, 0.5 cATP
　　　　　　　10 HEPES, 5 EGTA（pH7.2, 260mOsm）
　　　　　・HCのNMDA受容体を用いた放出検出（感度高い）
　　　　　　　HCの膜電位30-40mV
　　　　　　　10 uMグリシン
　　　　　　　　　細胞から300umのYチューブ(Suzuki,1990)で灌流
　　　　　　　　　　　放出されたグルタミン酸の急速な除去
　　　　　　　ほとんど脱感作しない
　　　　　　　　　HCのNMDA受容体脱感作せず（Release of endogenous excitatory amino acids from ON-type bipolar cells isolated from the goldfish retina）
　　　　　　　　　200 mM ionophoresis(150pA以下)で5secでも脱感作せず
　　　　　・HCの速い応答（CNQX 10uMで阻害）
　　　　　　　脱分極開始数msで不活性化開始τ=1.86ms
　　　　　　　　（Rapid AMPA receptor desensitization in catfish cone horizontal cellsの脱感作τ=1.1msと類似）
　　　　　　　CTZで不活性化消失

【結果】

　◆長い脱分極刺激
　　
　◆2峰
　　○速い要素
　　　　刺激直後
　　　　Caキレーターの影響をほとんど受けない
　　○遅い要素
　　　　脱分極中[Ca]i上昇でシナプス小胞の移動高まり登場
　　　　キレーターで消失・抑制

【関連】

　同研究（Biphasic transmitter release in retinal bipolar cells; Functions of Ca2+ in transmitter release from retinal bipolar cells）
　delayed release（Continuous vesicle cycling in the synaptic terminal of retinal bipolar cells）